近日，园区企业艾克发生物发布动态表示，艾克发生物利用自行研制的全自动染色机Alpha Painter X30及多靶点免疫组化染色试剂盒AlphaTSA Multiplex IHC Kit (cat# AXT36100041)提供相应技术支持，助力令狐恩强团队在Clin Transl Med.（IF=10.6）上发表研究成果。

2024年5月23日301第一医学中心消化内科主任医师令狐恩强团队在Clin Transl Med.（IF=10.6）上发表题为“Landscape of gut mucosal immune cells showed gap of follicular or memory B cells into plasma cells in immunological non-responders”的研究论文。该论文针对ART治疗后的PLWH的肠道粘膜进行了免疫学的相关探究，采用结肠镜活检中获得白细胞共计54475个免疫细胞、血液及粪便样本，通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)、mIHC、PCR、流式细胞术等方法进行整合分析。结果显示免疫无应答者（INRs）肠道IGKC+IgA+浆细胞的显著减少，而肠道IGKC+IgA+浆细胞的减少与滤泡/记忆B细胞向浆细胞分化的潜能降低密切相关。该研究结果为ART治疗后PLWH肠道免疫反应和肠道免疫恢复的病理研究奠定了基础。

图2.NCs、IRs和INRs的肠道组织的研究设计和单细胞转录组图（源自论文[1]）

2、INRs中肠道滤泡B细胞和记忆B细胞富集

由于发现了INRs中B细胞的富集，所以接下来进一步对肠道B细胞、浆细胞的7个亚群进行了分析。经研究发现与IRs和NCs相比，INRs中4个肠道B细胞亚群在细胞中表现出优先富集，特别是滤泡B细胞和记忆B细胞表现出了显著的富集，并且INRs中的IGLC2+IgA+和IGKC+IgA+浆细胞明显减少。同时mIHC方法验证得出B细胞(CD19+)升高，浆细胞(IgA+)含量下降。综上，INRs中肠道滤泡B细胞和记忆B细胞显著增加，而IgA+ 浆细胞明显减少。

图3.NCs、IRs和INRs的肠道组织中B细胞和浆细胞簇的亚群聚类（源自论文[1]）

3、INRs肠道滤泡或记忆性B细胞分化为浆细胞的潜力降低

由于在IRs和INRs的滤泡B细胞和记忆B细胞中发现了显著差异，所以有必要进一步分析来确定肠道浆细胞的减少是否与这些患者的B细胞分化水平有关，经研究发现在IRs和INRs之间的28个滤泡B细胞和记忆B细胞的DEGs发生了显著变化，并且在IRs中B细胞向浆细胞分化的关键转录因子XBP1高表达、XBP1转录因子和IgA+浆细胞成正比。综合来看在INRs中，滤泡或记忆B细胞分化为浆细胞的潜能下降。

图4.INRs中滤泡/记忆B细胞分化为浆细胞的研究（源自论文[1]）

4、INRs中记忆B细胞/Tfh细胞中CD74/MIF和CD74/COPA的表达降低

由于Tfh和B细胞之间的相互作用在B细胞向浆细胞分化中扮演很重要的作用，所以研究者比较了NCs、IRs和INRs中的这些相互作用，分析结果显示，与NCs和IRs相比，INRs中CD74/MIF和CD74/COPA在记忆B/Tfh细胞中的相互作用较低。并且研究者也通过mIHC染色对IRs患者的肠道组织切片进行了验证，证实了Tfh细胞（CD4+CXCR5+）与表达CD74的记忆B细胞（CD19+IgD-）空间相邻的关系。

图5.Tfh与滤泡/记忆B细胞之间的相互作用（源自论文[1]）

该mIHC实验由园区企业艾克发生物团队提供相应技术支持，设计Panel 1（IgA，CD138，DAPI）和Panel 2（CD4,CXCR5,CD19,CD74,DAPI），利用艾克发生物的全自动染色机Alpha Painter X30及多靶点免疫组化染色试剂盒AlphaTSA Multiplex IHC Kit (cat# AXT36100041)，直观检测显示不同标记物的共表达情况。